환경
컬럼 플러그 꽂기
높은 역압(High back pressure)
문제 해결
답변
조기 고압 문제를 일으키는 컬럼 막힘의 일반적인 원인은 다음과 같습니다.

1. 미생물 증식/오염(가장 일반적인 경우)

2. 이동상에 생물학적 미립자 유입됨

3. 웨어러블 시스템 부품(예: 펌프 Seal)에서 나오는 비 생물학적 미립자

4. 컬럼에 샘플 및/또는 샘플 매트릭스 축적됨(컬럼 세척 필요)

5. 샘플과 함께 주입되는 미립자

6. 이동상의 용해되지 않는 분석 물질의 침전

7. 높은 유기물에 너무 빨리 노출될 경우 버퍼염의 침전



추가 정보

미생물 오염이 문제인 경우:
미생물이 패킹 베드에 묻었기 때문에 컬럼을 제대로 세척할 수 없습니다.
컬럼이 미생물에 의해 오염된 경우에는 백 플러싱으로도 컬럼이 세척되지 않습니다.
이 문제를 해결하려면 용매 용기 필터(sinker)를 폐기하고 (제조업체의 지침에 따라) LC 시스템의 오염을 제거한 다음 새 sinker를 설치하십시오.
미생물 오염의 위험을 낮추기 위해 다음과 같은 적절한 이동상 처리가 필요합니다.
용기에 10% 미만의 유기 물질이 포함된 경우 24 ~ 48시간마다 저염도의 몰 수성(molarity aqueous) 이동상(예: 10mM)을 교체하십시오. 최소 10%의 유기 용매가 포함된 경우 유기 용매가 심하게 증발하지 않는 한 매주 교체할 수 있습니다.
Waters BEH SEC 컬럼을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피(SEC Method)에 대해서는 Guide to Size-Exclusion Chromatography (SEC) of mAb Aggregates, Monomers, and Fragments(mAb 응집체, 단량체 및 조각의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 안내서)의 "이동상 처리" 섹션을 참조하십시오.

관련 동영상 보기: Do you have to change aqueous mobile phase every day? | Trust your Science 7 - Highlights how microbial growth can contaminate system in ~2 days and disrupt chromatography.
https://www.youtube.com/watch?v=3uN9_uCuc-o&list=UUlwrPsoqFZsno4jyz0JEACw&index=8

관련 동영상 보기: Attack of the column killing aqueous mobile phase bacteria! | Trust Your Science 18 - Highlights how a reen laser can help you “see” bacterial growth in mobile phase. Also shows impact of microbial contamination on SEC columns.
https://www.youtube.com/watch?v=5b_WYgDVtOA&t=175s

만약 비 생물학적 미립자(이동상, 기기, 샘플 등)에 의해 컬럼이 막혔다면:
컬럼을 0.1mL/분의 속도로 검출기가 아닌 비커로 백 플러싱하여 문제를 해결할 수 있습니다.
비 생물학적 샘플에 의해 컬럼이 막히는 것을 방지하려면 다음과 같이 하십시오.
입자 크기가 3.5µm 이하인 컬럼에 대해 0.2µm의 필터링으로 이동상을 필터링합니다.
입자 크기가 3.5µm 이상의 컬럼에 대해 0.45µm의 필터링으로 이동상을 필터링합니다.
사전 컬럼 인라인(In-line) 필터 또는 가드 카트리지를 사용하면 컬럼이 비 생물학적 미립자로 인해 막히는 것을 방지할 수 있습니다.
지난 12개월 내에 기기 예방 유지 관리(PM)를 수행했는지 확인합니다.
펌프 Seal은 시간이 지남에 따라 마모되고 미세 입자가 이동상과 컬럼의 Inlet 프릿에 유입될 수 있으므로 매년(때로는 더 자주) 교체해야 합니다.

만약 샘플 매트릭스가 컬럼에 축적되었다면:
컬럼 관리 및 사용 설명서에 따라 적절한 용매로 컬럼을 세척할 수 있습니다.

만약 무언가가 컬럼에 침전된 경우:
긴 시간 동안 완만한 그래디언트를 실행해 침전물을 용해시킬 수 있습니다.